苹果炭疽病检测

检测项目

1.病原菌分离培养：采用PDA培养基（pH6.50.2），培养温度251℃，湿度85%条件下观察菌落形态及产孢特征

2.分子生物学检测：基于ITS1/ITS4引物（序列：TCCGTAGGTGAACCTGCGG/TCCTCCGCTTATTGATATGC）进行PCR扩增，产物测序后与GenBank数据库比对

3.分生孢子形态测量：使用显微测微尺测定分生孢子长度（8.5-16.5μm）与宽度（3.5-5.5μm），统计长宽比（2.3-3.8:1）

4.致病性测定：离体接种试验采用刺伤接种法（针头直径0.3mm），接种浓度110⁶spores/mL

5.抗药性分析：测试多菌灵（浓度梯度0.1-100μg/mL）、嘧菌酯（0.05-50μg/mL）的EC50值

检测范围

1.新鲜苹果果实：重点检测果面病斑处的病原菌分离率及孢子密度

2.果树叶片样本：分析叶背分生孢子盘密度（单位面积≥5个/cm为阳性）

3.枝条病组织：进行石蜡切片观察分生孢子盘结构（深度80-120μm）

4.果园土壤样本：测定炭疽菌厚垣孢子存活量（阈值≥10CFU/g）

5.苗木接穗材料：采用巢式PCR法检测潜伏侵染情况（检出限0.1pgDNA）

检测方法

1.ISO16140-3:2022《食品链微生物学-方法验证-第3部分》规定的实时荧光定量PCR验证流程

2.GB/T23222-2008《植物检疫苹果炭疽病菌检疫鉴定方法》规范的分生孢子测量标准

3.ASTMD8083-16《植物病原真菌分子检测通用指南》的DNA提取与纯化程序

4.GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程》中关于种苗带菌率的统计方法

5.SN/T1809-2006《进出境植物检疫炭疽病菌检疫鉴定方法》的致病性测试要求

检测设备

1.PCR扩增仪：Bio-RadT100ThermalCycler（温度精度0.2℃，支持梯度PCR）

2.荧光显微镜：OlympusBX53（配备DP80双摄像头系统，1000油镜）

3.超净工作台：ESCOAC2-4S1（HEPA过滤效率99.99%，风速0.45m/s20%）

4.恒温培养箱：MemmertIPP110（温度范围0-70℃，波动度0.3℃）

5.离心机：Eppendorf5430R（最大转速30,000rpm，温控范围-20℃至40℃）

6.电泳系统：Bio-RadPowerPacBasic（输出电压10-300V，电流400mA）

7.超微量分光光度计：ThermoNanoDropOne（检测范围2-27,000ng/μLdsDNA）

8.生物安全柜：NuAireNU-437-400（Ⅱ级A2型，循环风量760m/h）

9.冷冻干燥机：LabconcoFreeZone2.5L（冷阱温度-84℃，真空度<100mTorr）

10.显微成像系统：LeicaDM750+ICC50W（500万像素CMOS传感器）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

CMA/CNAS等证书详情，因时间等不可抗拒因素会发生变更，请咨询在线工程师.