酶促反应动力学实验

检测项目

基本动力学参数检测：

• 米氏常数(Km)：值范围0.01-100mM（参照IUBMB指南）
• 最大反应速率(Vmax)：单位μmol/min/mg（参照酶活力测定标准）
• 催化常数(kcat)：s^{-1}（计算要求精度±5%）

• 酶活力单位：U/mg（定义参照标准方法）
• 比活性：催化效率≥100min^{-1}mg^{-1}

• 最适pH：值范围3.0-10.0（精度±0.1）
• pH稳定性：半衰期≥60min（参照缓冲体系标准）

• 最适温度：℃范围20-80（精度±0.5℃）
• 热失活常数：Kd值测定（单位min^{-1}）

• 抑制剂常数(Ki)：μM级（参照可逆抑制剂标准）
• 抑制类型：竞争性/非竞争性判定

• 激活常数(Ka)：mM级（精度±2%）
• 激活效率：倍数变化≥1.5

• 底物选择性：Km比值分析
• 特异常数：kcat/Km差异≤10%

• 储存稳定性：残留活力≥80%（4℃/30天）
• 操作稳定性：循环使用次数≥5

• 底物浓度范围：0.1-10Km
• 缓冲液离子强度：0.05-0.2M

• 线性化拟合：双倒数斜率误差≤5%
• 非线性回归：R²≥0.99

检测范围

1.蛋白酶类：如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶，重点检测肽键水解反应的Km和Vmax优化

2.氧化还原酶类：如葡萄糖氧化酶、过氧化物酶，侧重氧化还原速率及电子转移效率测试

3.转移酶类：如激酶、转氨酶，检测磷酸基团或氨基转移的催化常数

4.水解酶类：如脂肪酶、淀粉酶，针对酯键或糖苷键水解的底物特异性分析

5.裂合酶类：如碳酸酐酶、醛缩酶，测试脱水或加成反应的动力学参数

6.异构酶类：如磷酸葡萄糖异构酶，检测异构化过程的最适pH和温度

7.荧光标记酶：如荧光素酶，重点量化荧光强度变化的反应初速度

8.固定化酶：如载体结合酶，检测固定化后的Km漂移和稳定性参数

9.酶抑制剂筛选样品：如小分子化合物库，侧重Ki测定和抑制类型鉴定

10.酶激活剂样品：如金属离子制剂，测试激活常数和催化效率提升

检测方法

国际标准：

• IUBMBEnzymeKinetics:MeasurementandDataAnalysis
• ISO标准酶活性测定规程

• GB/T酶促反应动力学试验通用方法
• GB/T酶抑制剂常数测定标准

检测设备

1.紫外可见分光光度计：UV-2600型（波长范围190-1100nm，分辨率±0.1nm）

2.荧光光度计：FL-6500型（激发波长200-800nm，检测限0.01RFU）

3.pH计：PH-100型（精度±0.01pH，温度补偿±0.1℃）

4.恒温水浴槽：WT-200型（温控范围0-100℃，稳定性±0.1℃）

5.酶标仪：EM-9600型（96孔板高通量，吸光度精度±0.005）

6.高效液相色谱仪：HPLC-1200型（流速0.1-10mL/min，检测限1ng）

7.离心机：CF-16型（转速100-15000rpm，容量50mL）

8.精密移液器：MP-10型（体积范围0.1-1000μL，误差≤0.5%）

9.磁力搅拌器：MS-500型（转速50-1500rpm，功率50W）

10.数据采集系统：DAQ-2000型（采样率100Hz，接口USB）

11.恒温摇床：IS-100型（振荡频率0-300rpm，温控±0.5℃）

12.停流装置：SF-50型（混合时间<2ms，检测延迟10μs）

13.温度控制器：TC-300型（PID控制，范围-20-150℃）

14.酶反应器：ER-100型（微流控设计，体积10-100μL）

15.缓冲液制备系统：BP-500型（离子强度调节精度±0.01M）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

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