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菌株原始种子冻融循环试验

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发布时间:2025-07-12 09:19:17
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检测项目

活性检测:

  • 存活率测定:存活率≥90%(参照ISO 16140-2:2016)
  • 代谢活性检测:ATP生物发光值RLU≥1000,呼吸率变化≤10%
遗传稳定性检测:
  • DNA完整性:降解率≤5%(参照GB/T 34796-2017)
  • RNA完整性:RIN值≥7.0
  • 基因突变率:突变频率≤10^-6/代
物理完整性检测:
  • 细胞膜完整性:PI染色阳性率≤5%
  • 细胞形态变化:形态异常率≤10%
复苏能力检测:
  • 菌落形成单位:CFU≥10^7/mL
  • 复苏时间:复苏至对数生长期≤24h
生化特性检测:
  • 酶活性检测:关键酶活性保留率≥80%
  • 代谢产物分析:目标产物浓度变化≤15%
冻融耐受性检测:
  • 循环次数耐受:最大耐受循环数≥15次
  • 温度变化速率耐受:降温速率≤1°C/min,升温速率≤2°C/min
污染检测:
  • 微生物污染:杂菌检出率≤0.1%
  • 化学污染物:残留溶剂≤10ppm
菌落形成检测:
  • CFU计数:变异系数CV≤5%
  • 菌落大小:平均直径变化≤10%
代谢功能检测:
  • 糖酵解速率:变化率≤10%
  • 氧化磷酸化效率:ATP产量变化≤15%
长期稳定性检测:
  • 储存后活性:6个月后存活率≥85%
  • 遗传漂变:SNP频率变化≤0.01%

检测范围

1. 细菌原始种子: 涵盖大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阴性/阳性菌,重点检测冻融后存活率和遗传突变风险。

2. 真菌原始种子: 包括曲霉菌、酵母菌等,侧重代谢活性保持和菌丝形态完整性测试。

3. 放线菌原始种子: 涉及链霉菌属等,核心检测抗生素产生能力和孢子复苏率。

4. 乳酸菌原始种子: 如乳杆菌、双歧杆菌,重点验证冻融后酸耐受性和益生功能稳定性。

5. 病毒载体种子: 包括腺病毒、慢病毒载体,侧重遗传物质完整性和感染效价变化。

6. 古菌原始种子: 如嗜热古菌,检测极端温度下活性和酶功能保留。

7. 工程菌株种子: 基因修饰菌株,重点测试外源基因表达稳定性和质粒丢失率。

8. 环境微生物种子: 如土壤微生物,核心检测污染耐受性和复苏能力。

9. 工业发酵菌种: 包括生产菌株,侧重代谢产物一致性和发酵效率变化。

10. 临床分离株种子: 如病原菌参考株,重点验证抗生素敏感性保持和毒力因子稳定性。

检测方法

国际标准:

  • ISO 16140-2:2016 微生物方法验证(包含存活率测定)
  • ISO 21528-2:2017 微生物生化特性检测
  • ISO 7218:2007 微生物污染控制方法
  • ISO 4833-1:2013 菌落计数通用方法
国家标准:
  • GB/T 34796-2017 微生物遗传稳定性检测(与ISO差异:冻融循环次数上限为20次)
  • GB 4789.2-2016 食品微生物菌落总数测定(与ISO差异:培养温度设定为30°C)
  • GB/T 38502-2020 微生物复苏能力试验方法(与ISO差异:复苏时间要求≤24h)
  • GB/T 35536-2017 细胞膜完整性检测(与ISO差异:使用PI染色浓度0.1μg/mL)

检测设备

1. 低温循环箱: Thermo Scientific TSX-600型(温度范围-80°C至+100°C,精度±0.5°C)

2. 流式细胞仪: BD FACSAria III型(检测限达10^3细胞/mL,激光波长488nm)

3. PCR仪: Applied Biosystems 7500型(温度控制精度±0.1°C,升降温速率5°C/s)

4. 冷冻干燥机: Labconco FreeZone 6L型(真空度≤0.05mbar,冷阱温度-80°C)

5. 生物发光检测仪: Promega GloMax型(灵敏度0.1fmol ATP,动态范围10^6)

6. 显微镜: Olympus BX53型(放大倍数40x-1000x,分辨率0.2μm)

7. 恒温培养箱: Memmert IN110型(温度范围+5°C至+70°C,均匀度±0.3°C)

8. 离心机: Eppendorf 5430R型(最大转速15,000rpm,容量4×100mL)

9. 酶标仪: BioTek Synergy H1型(波长范围200-999nm,精度±1%)

10. 呼吸率检测仪: Oxygraph+型(耗氧量检测限0.1nmol/min,精度±2%)

11. 基因测序仪: Illumina MiSeq型(读长2×300bp,通量25M reads)

12. 菌落计数器: Scan 500型(自动计数误差≤1%,检测范围10-10^6 CFU)

13. 恒温振荡器: New Brunswick Innova 42型(转速50-500rpm,温度控制±0.5°C)

14. 紫外分光光度计: Shimadzu UV-2600型(波长范围190-1100nm,带宽1nm)

15. 细胞破碎仪: Sonics VCX750型(频率20kHz,功率750W)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

CMA/CNAS等证书详情,因时间等不可抗拒因素会发生变更,请咨询在线工程师.

内容-荣誉资质

其他证书详情(可咨询在线工程师):

荣誉资质 国防经济发展促进会 AAA级信用证书

合作客户(部分)

1、自改制以来和政、企、军多方多次合作,并获得众多好评;

2、始终以"助力科学进步、推动社会发展"作为研究院纲领;

3、坚持科学发展道路,统筹实验建设与技术人才培养共同发展;

4、学习贯彻人大精神,努力发展自身科技实力。

合作客户

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