检测项目
细胞毒性检测:
- 细胞存活率:MTT法测定,存活率≥70%(参照ISO10993-5)
- 乳酸脱氢酶释放:酶标法测定,释放量≤200U/L
- 膜完整性检测:台盼蓝排斥率,存活细胞比例≥85%
炎症因子检测:- TNF-α浓度:ELISA法测定,表达量≤50pg/mL
- IL-6浓度:ELISA法测定,表达量≤30pg/mL
- IL-1β浓度:ELISA法测定,表达量≤20pg/mL
氧化应激检测:- 丙二醛含量:TBA法测定,MDA浓度≤4nmol/mgprotein
- 超氧化物歧化酶活性:WST-1法测定,SOD活性≥30U/mgprotein
- 谷胱甘肽过氧化物酶活性:酶促反应法测定,GSH-Px活性≥20U/mgprotein
细胞凋亡检测:- 凋亡率:AnnexinV-FITC/PI流式法,凋亡细胞比例≤15%
- Caspase-3活性:荧光底物法测定,活性值≤2.0RFU
- DNA碎片化:TUNEL染色法,阳性细胞率≤10%
基因表达分析:- NF-κBp65mRNA:RT-qPCR法测定,Ct值差≤2.0
- iNOS表达:RT-qPCR法测定,表达倍数变化≤1.5
- HO-1基因表达:RT-qPCR法测定,表达倍数变化≥1.2
蛋白质表达检测:- Westernblot分析:目标蛋白条带灰度值差异≤20%
- 免疫荧光染色:荧光强度阈值≥500AU
- ELISA定量:特定蛋白浓度误差±5%
形态学观察:- HE染色形态:细胞皱缩率≤10%
- 荧光显微镜观察:细胞核碎裂指数≤5%
- 扫描电镜结构:膜完整性评分≥8级
细胞周期分析:- G1/S期比例:流式细胞术测定,G1期细胞≥60%
- 凋亡峰比例:Sub-G1峰值≤10%
- 增殖指数:PI值≥1.5
迁移能力检测:- 划痕实验迁移率:迁移距离变化≥80μm/h
- Transwell侵袭:穿膜细胞数≤50个/视野
- 细胞粘附率:粘附细胞比例≥70%
屏障功能测试:- 跨内皮电阻值:TEER测定,电阻≥100Ω·cm²
- 渗透系数:荧光素钠法测定,Papp≤1.0×10⁻⁶cm/s
- 紧密连接蛋白表达:ZO-1阳性率≥90%
检测范围
1.活血化瘀类中药单体提取物:涵盖丹参酮、川芎嗪、红花黄色素等单体化合物,重点检测细胞毒性和氧化应激指标。
2.中药复方水提物:如血府逐瘀汤、桃红四物汤全方提取物,侧重多成分协同效应导致的炎症因子升高。
3.中药乙醇提取物:包括当归、三七等乙醇萃取物,检测脂溶性成分对细胞凋亡及迁移能力的抑制。
4.中药材粉末直接添加物:如丹参、赤芍等生药粉末,测试物理刺激和生物活性对膜完整性的影响。
5.中药注射剂模拟制剂:丹参注射液、血栓通注射液等稀释液,重点检测无菌条件下的急性LDH释放。
6.细胞培养添加后培养基:中药处理后的残留培养液,分析残余毒性对细胞周期分布的扰动。
7.生理模拟体液环境制剂:人工模拟血清或胆汁中的中药制剂,检测生理pH下NF-κB通路的激活程度。
8.纳米载体负载中药制剂:脂质体或聚合物包埋中药,测试缓释效应下的SOD活性变化。
9.中药肝代谢产物制剂:肝微粒体孵育后的次级代谢物,侧重检测Caspase-3活性的升高。
10.阳性对照品:如醋酸泼尼松或LPS诱导剂,用于验证模型敏感性及TEER值下降。
检测方法
国际标准:
- ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价-第5部分:体外细胞毒性试验
- ASTMF2312-11细胞凋亡检测标准指南
- ISO23893-3:2013水质-鱼肝细胞毒性测试
国家标准:- GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验
- GB/T5009.156-2016食品接触材料细胞毒性试验
- GB/T38117-2019化学品体外肝细胞毒性测试
(方法差异说明:ISO10993-5与GB/T16886.5在细胞培养时间上存在差异,ISO要求24-72小时培养,GB则限定48小时标准测试;ASTMF2312与GB标准在凋亡检测荧光标记浓度上不同,ASTM推荐1μg/mLAnnexinV,GB为0.5μg/mL;ISO23893-3适用于鱼类肝细胞,而GB/T38117专用于哺乳动物肝细胞模型。)
检测设备
1.多功能酶标仪:ThermoScientificMultiskanSky(波长范围200-999nm,精度±0.5%)
2.流式细胞仪:BDFACSCantoII(激光配置488nm/640nm,检测通道8个)
3.高速离心机:EppendorfCentrifuge5424R(转速范围100-15000rpm,容量24×1.5mL)
4.二氧化碳培养箱:ThermoScientificHeracell150i(温度范围4-50°C,CO2浓度0-20%,湿度90%)
5.倒置显微镜:OlympusIX73(物镜放大4x-100x,分辨率0.2μm)
6.荧光显微镜:LeicaDMi8(荧光模块GFP/RFP,激发波长470-630nm)
7.全自动生化分析仪:Hitachi7180(检测项目LDH/SOD/MDA,精度CV≤3%)
8.实时定量PCR仪:Bio-RadCFX96Touch(温度梯度±0.1°C,通道数6)
9.Westernblot系统:Bio-RadMini-PROTEANTetraCell(电压范围50-300V,凝胶尺寸8×10cm)
10.细胞培养生物安全柜:EscoClassIIA2(风速0.3-0.5m/s,HEPA过滤效率99.99%)
11.超低温冰箱:ThermoScientificForma900(温度范围-86°C,容量700L)
12.纯水制备系统:Milli-QAdvantageA10(产水电阻率18.2MΩ·cm,流量2L/min)
13.精密电子天平:SartoriusCubisII(量程0-220g,精度0.001mg)
14.微量移液器组:EppendorfResearchplus(体积范围0.1-1000μL,误差±0.8%)
15.制冰机:ScotsmanAF103(产冰量100kg/24h,冰粒尺寸10mm)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).
CMA/CNAS等证书详情,因时间等不可抗拒因素会发生变更,请咨询在线工程师.
合作客户(部分)
1、自创办以来和政、企、军多方多次合作,并获得众多好评;
2、始终以"助力科学进步、推动社会发展"作为研究院纲领;
3、坚持科学发展道路,统筹实验建设与技术人才培养共同发展;
4、学习贯彻人大精神,努力发展自身科技实力。