检测项目
片段大小分析:
- 平均片段大小:目标范围(bp)、分布宽度(SD≤50bp,参照ISO20395)
- 片段完整性:DV200值(≥50%)、片段峰对称性(偏度≤0.5)
浓度检测:- 核酸浓度:DNA(ng/μl)、RNA(ng/μl,误差±5%)
- 摩尔浓度:文库摩尔量(nM)、适配体摩尔比(1:1比例)
接头连接效率:- 连接成功率:接头连接率(≥95%)、未连接片段比例(<5%)
- 适配体兼容性:兼容序列匹配度(≥98%)、二聚体形成率(≤2%)
PCR扩增质量:- 扩增偏差:扩增CV值(≤5%)、引物二聚体含量(<1%)
- 扩增均匀性:覆盖偏差(≤10%)、扩增效率(90-110%)
文库纯度测试:- 吸光度比值:OD260/280(1.8-2.0)、OD260/230(2.0-2.2)
- 污染物检测:盐离子残留(≤0.5mM)、有机溶剂残留(<0.1%)
嵌合体与重复序列:- 嵌合体率:嵌合序列比例(<1%,参照GB/T12345)
- 重复序列:PCR重复率(≤10%)、独特分子标识符(UMI)错误率(<0.5%)
文库完整性:- 末端完整性:5'/3'末端缺失率(≤3%)、缺口检测(无缺口≥99%)
- 全长比例:全长序列占比(≥85%)、断裂序列(<5%)
适配体特异性:- 结合特异性:靶序列结合率(≥98%)、脱靶率(≤1%)
- 索引标签质量:标签错误率(<0.1%)、标签交叉污染(≤0.5%)
测序适用性:- 簇密度:簇形成密度(100-1000K/mm²)、簇通过率(≥90%)
- 读长均匀性:读长偏差(≤10%)、覆盖深度(≥30X)
稳定性测试:- 储存稳定性:-80°C保存失活率(≤5%/年)、冻融循环耐受(≥5次)
- 运输稳定性:温度波动影响(Δ浓度≤2%)、震动耐受(无断裂)
检测范围
1.全基因组DNA文库:涵盖人类、动植物样本,重点检测片段大小分布均匀性、接头连接效率和PCR扩增偏差,确保全基因组覆盖无缺口。
2.RNA测序文库:包括mRNA和总RNA样本,检测RNA完整性(RIN≥7)、反转录产物质量和嵌合体率,保证转录本准确捕获。
3.外显子捕获文库:针对目标区域富集,侧重捕获效率(≥90%)、脱靶率(≤5%)和文库纯度,优化杂交特异性。
4.单细胞测序文库:适用于低输入样本,检测起始材料量(≥1细胞)、扩增偏差(CV≤10%)和UMI错误率,确保单细胞分辨率。
5.宏基因组文库:覆盖环境微生物样本,重点检测污染物残留、嵌合体率(<2%)和多样性偏差,维持群落代表性。
6.ChIP-seq文库:用于染色质免疫沉淀产物,检测片段大小(150-300bp)、抗体特异性(≥95%)和接头连接效率,保障蛋白结合位点准确性。
7.长读长测序文库:包括纳米孔和PacBio技术,侧重片段长度(≥10kb)、末端完整性和PCR-free扩增,优化长读数据质量。
8.甲基化测序文库:针对亚硫酸氢盐处理样本,检测转化效率(≥99%)、片段损伤率和覆盖均匀性,确保甲基化模式可靠性。
9.靶向扩增子文库:涵盖PCR扩增产物,重点检测扩增特异性(≥98%)、引物二聚体(<1%)和索引标签质量,避免交叉污染。
10.游离DNA文库:适用于液体活检样本,检测低浓度输入(≥1ng)、片段大小分布(160-180bp峰)和嵌合体率,提高肿瘤标志物灵敏度。
检测方法
国际标准:
- ISO20395:2019高通量测序文库质量评价方法
- ISO17861:2020核酸片段大小分析规范
- ISO21571:2020DNA提取与文库制备指南
国家标准:- GB/T34001-2021基因测序文库制备技术要求
- GB/T30988-2020RNA完整性检测方法
- GB/T28022-2020高通量测序数据质量控制
方法差异说明:国际标准ISO20395采用荧光定量法测试浓度,误差限±10%,而国家标准GB/T34001使用吸光度法,误差限±5%,导致检测阈值不同;在片段大小分析中,ISO17861要求毛细管电泳分辨率5bp,GB/T30988规定凝胶电泳分辨率10bp,影响精度要求。
检测设备
1.毛细管电泳仪:Agilent2100Bioanalyzer(片段大小范围35-12000bp,分辨率±5bp)
2.荧光定量PCR仪:AppliedBiosystemsQuantStudio5(检测限0.001ng/μl,动态范围0.01-1000ng/μl)
3.分光光度计:ThermoFisherNanoDropOne(波长范围190-840nm,精度±0.1OD)
4.微流控芯片系统:FluidigmC1(单细胞输入,通量96样本/run)
5.高通量测序仪:IlluminaNovaSeq6000(读长2x150bp,产出6Tb/run)
6.超声破碎仪:CovarisM220(片段大小100-600bp,功率峰值140W)
7.自动化文库制备系统:BeckmanBiomeki7(处理速度96样本/4h,误差率≤1%)
8.离心机:Eppendorf5424R(最大转速15000rpm,温控精度±0.5°C)
9.恒温混匀仪:BenchmarkScientificH1000(温度范围4-100°C,震荡频率300-1500rpm)
10.凝胶成像系统:Bio-RadChemiDoc(灵敏度0.1pg,分辨率20μm)
11.核酸提取仪:QiagenQIAcube(通量24样本/run,回收率≥95%)
12.低温存储设备:ThermoScientificJianCeTFreezer(温度-80°C,稳定性±1°C)
13.真空离心浓缩仪:LabconcoCentriVap(蒸发速度1mL/min,温度控制30-60°C)
14.电泳电源:Bio-RadPowerPac(电压范围10-300V,电流稳定性±1%)
15.振荡培养箱:NewBrunswickInnova44(温度范围-10-80°C,CO2控制精度±0.1%)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。
注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).
CMA/CNAS等证书详情,因时间等不可抗拒因素会发生变更,请咨询在线工程师.
合作客户(部分)
1、自创办以来和政、企、军多方多次合作,并获得众多好评;
2、始终以"助力科学进步、推动社会发展"作为研究院纲领;
3、坚持科学发展道路,统筹实验建设与技术人才培养共同发展;
4、学习贯彻人大精神,努力发展自身科技实力。