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蛋白肽结构表征试验

原创
发布时间:2025-08-19 10:17:16
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检测项目

分子特征测定:

  • 分子量分布:范围500-10000Da(参照ISO9276-6)
  • 等电点(pI):测定值±0.2单位(参照IUPAC准则)
序列分析:
  • N-末端序列:Edman降解准确度≥95%
  • C-末端序列:羧肽酶法覆盖率≥90%
二级结构鉴定:
  • α-螺旋含量:CD光谱测定精度±5%
  • β-折叠含量:傅里叶变换红外光谱(FTIR)分析
三级结构分析:
  • 疏水性:HPLC滞留时间偏差≤0.5min
  • 折叠状态:荧光发射波长范围280-350nm
纯度检测:
  • HPLC纯度:≥98.0%(参照USP<621>)
  • SDS-PAGE纯度:单一条带比例≥95%
稳定性测试:
  • 热稳定性:Tm值测定精度±0.5°C
  • pH稳定性:构象变化阈值pH3.0-10.0
生物活性测试:
  • 酶活性:比活力单位≥50U/mg
  • 结合亲和力:KD值≤10nM
修饰分析:
  • 磷酸化位点:质谱检出限0.1%
  • 糖基化模式:寡糖链结构鉴定
聚集状态检测:
  • 单体含量:SEC测定≥90%
  • 聚集度:动态光散射(DLS)粒径分布
电荷异质性:
  • 电荷变体分析:毛细管电泳(CE)分辨率R≥1.5
  • 等电聚焦:pI梯度范围3-10

检测范围

1.重组蛋白:涵盖治疗性蛋白制品,重点检测表达系统引起的结构变异和功能性验证

2.合成肽:人工化学合成多肽,侧重序列准确度、纯度和二硫键形成分析

3.抗体药物:单克隆抗体及片段,聚焦CDR区域构象、Fc段糖基化和亲和力维持

4.酶制剂:工业用蛋白酶/脂肪酶,检测活性位点完整性、热稳定性及底物特异性

5.疫苗抗原:蛋白类疫苗成分,重点测试免疫原性相关表位结构和聚集风险

6.诊断试剂蛋白:标记抗体或抗原,检测标记效率、特异性结合及背景干扰控制

7.食品添加剂肽:功能性多肽添加剂,侧重安全性杂质检测(如内毒素≤10EU/mg)及溶解性验证

8.化妆品活性肽:抗衰老或保湿肽,重点渗透性测试、光稳定性及构象持久性

9.研究用模型蛋白:实验室标准蛋白,检测基本分子参数和批次一致性

10.基因工程融合蛋白:链接结构融合体,聚焦连接区域稳定性、功能性域协同效应

检测方法

国际标准:

  • ISO20483:2013谷物豆类氮含量测定(适用于蛋白定量)
  • IUPAC2002氨基酸序列分析标准方法
  • ASTME2227-23紫外光谱蛋白质纯度测定
  • Ph.Eur.2.2.47毛细管电泳法(CE)电荷异质性分析
国家标准:
  • GB/T5009.124-2016食品蛋白质测定方法(凯氏定氮法)
  • GB/T30986-2014生物制品蛋白质含量测定
  • GB/T34800-2017蛋白质二级结构圆二色光谱分析法
  • GB/T33427-2016重组蛋白药物杂质检测规程
(国际与国家方法差异:例如ISO20483氮测定精度±0.1%,GB/T5009.124采用改良凯氏法精度±0.2%;ASTME2227紫外光谱波长范围200-400nm,GB/T33427扩展至250-300nm以增强灵敏度)

检测设备

1.质谱仪:ThermoQExactiveHF-X型(分辨率R=140,000,质量精度≤1ppm)

2.圆二色光谱仪:JASCOJ-1500型(波长范围190-260nm,温度控制±0.1°C)

3.高效液相色谱系统:Agilent1260InfinityII型(流速范围0.01-10mL/min,UV检测器波长190-800nm)

4.傅里叶变换红外光谱仪:PerkinElmerSpectrumTwo型(分辨率4cm⁻¹,扫描次数32次)

5.动态光散射仪:MalvernZetasizerNanoZS型(粒径测量范围0.3nm-10μm,精度±1%)

6.毛细管电泳系统:BeckmanPA800Plus型(电压范围0-30kV,检测限0.1μg/mL)

7.荧光光谱仪:HoribaFluorolog-QM型(激发波长250-800nm,发射检测范围280-900nm)

8.等电聚焦电泳仪:Bio-RadMini-PROTEANTetra型(pH梯度3-10,运行时间60min)

9.酶标仪:TecanInfiniteM200Pro型(波长范围230-1000nm,孔板兼容96/384孔)

10.超高效液相色谱-质谱联用系统:WatersACQUITYUPLCI-Class/XevoTQ-S型(流速0.001-2mL/min,ESI离子源)

11.圆二色显微镜:AppliedPhotophysicsChirascanV100型(温度范围-10°C至110°C)

12.尺寸排阻色谱系统:ShimadzuProminenceLC-20AT型(柱温控制4°C-80°C,分子量范围500-2000kDa)

13.恒温槽:JulaboF12型(温度稳定性±0.01°C,范围-20°C至150°C)

14.紫外-可见分光光度计:ShimadzuUV-2600型(波长范围190-1100nm,带宽1nm)

15.离心机:EppendorfCentrifuge5430型(转速100-15000rpm,温度控制±0.5°C)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

CMA/CNAS等证书详情,因时间等不可抗拒因素会发生变更,请咨询在线工程师.

合作客户(部分)

1、自创办以来和政、企、军多方多次合作,并获得众多好评;

2、始终以"助力科学进步、推动社会发展"作为研究院纲领;

3、坚持科学发展道路,统筹实验建设与技术人才培养共同发展;

4、学习贯彻人大精神,努力发展自身科技实力。

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