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甲基化检测

原创
发布时间:2025-06-30 21:01:22
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检测项目

基因组甲基化扫描:

  • 全甲基化水平分析:β值范围(0-1)、CpG岛覆盖率≥98%(参照ENCODE项目规范)
  • 甲基化热点检测:变异频率(±0.02标准差)、关联位点密度(≥5位点/kb)
  • 甲基化漂移监测:年度变化率(≤0.05%)
位点特异性检测:
  • 基因启动子甲基化:甲基化指数(MI≥0.85)、结合位点数量(≥10位点)
  • 增强子区域分析:修饰强度(0-100%)、保守序列一致性(误差±2bp)
  • CpG岛甲基化状态:岛大小阈值(≥200bp)、甲基化比例偏差(±0.03)
甲基化定量分析:
  • 全局甲基化水平:5-mC含量(0-100%)、相对丰度误差(±0.1%)
  • 单碱基分辨率检测:甲基化位点精度(≥99.9%)、测序深度(≥30X)
  • 甲基化动态变化:速率常数(k≤0.001/s)、时间梯度响应(误差±5分钟)
甲基化敏感性酶切:
  • 限制性内切酶效率:切割率(≥95%)、片段大小(100bp-10kb)
  • 甲基化保护检测:未切割比例(≤5%)、酶特异性(误差±1%)
  • 酶切产物分析:凝胶迁移率(误差±0.5mm)、荧光强度阈值(RFU≥1000)
高通量甲基化测序:
  • 全基因组重亚硫酸盐测序:转换率(≥99%)、覆盖率(≥95%)
  • 目标区域捕获:捕获效率(≥90%)、深度均匀性(CV≤0.1)
  • 单细胞甲基化分析:细胞输出率(≥80%)、数据集完整性(≥98%)
甲基化特异性PCR:
  • MSP扩增效率:Ct值范围(15-35)、熔解曲线Tm(误差±0.5°C)
  • Q-MSP定量:拷贝数线性(R²≥0.99)、检测限(≤0.1%)
  • 甲基化引物设计:特异性(≥98%)、GC含量(40-60%)
甲基化芯片分析:
  • Infinium阵列检测:探针信号强度(Log R ratio误差±0.2)、β值精度(±0.01)
  • 甲基化位点覆盖:芯片位点数(≥850,000)、重复一致性(ICC≥0.95)
  • 芯片杂交质量:背景噪声(≤5%)、信号阈值(DetP≤0.01)
DNA甲基转移酶活性:
  • 酶动力学参数:Km值(0.1-10μM)、Vmax误差(±5%)
  • 抑制剂敏感性:IC50范围(0.01-100μM)、剂量响应曲线(R²≥0.98)
  • 活性单位定义:单位酶活性(≥100 U/mg)、温度稳定性(37°C±1°C)
甲基化修饰检测:
  • 5-羟甲基化分析:hmC水平(0-100%)、特异性抗体结合(效价≥1:1000)
  • 甲基化氧化产物:5-醛基胞嘧啶含量(≤0.001%)、检测灵敏度(LOD=0.0001%)
  • 修饰动态追踪:修饰速率(k≥0.01/min)、时间分辨率(±1秒)
液体活检甲基化:
  • cfDNA甲基化:片段大小(100-200bp)、检出限(≥5 copies/mL)
  • 循环肿瘤DNA分析:甲基化标志物数量(≥3)、特异性(≥95%)
  • 血浆样本检测:背景干扰(≤10%)、回收率(80-120%)
表观遗传调控分析:
  • 甲基化与基因表达关联:相关系数(|r|≥0.7)、调控网络节点数(≥50)
  • 环境暴露响应:甲基化变化幅度(≥10%)、响应时间(≤24h)
  • 甲基化稳定性:长期漂移率(≤0.1%/年)、温度影响(误差±0.5°C)

检测范围

1. 血液样本: 外周血或全血提取DNA,重点检测白细胞甲基化谱变化及循环游离DNA甲基化标志物,用于癌症早期筛查和免疫表观遗传研究。

2. 组织样本: 新鲜或冷冻组织(如肿瘤、肝脏),侧重特异性基因启动子甲基化分析和组织异质性测试,应用于病理诊断和疾病机制探究。

3. 唾液样本: 非侵入性采集口腔上皮细胞DNA,检测甲基化水平变异,重点测试口腔疾病相关甲基化标记及样本稳定性。

4. 细胞系样本: 体外培养细胞(如HEK293、HeLa),分析甲基化动态变化和药物处理响应,用于表观遗传药物筛选和细胞模型验证。

5. 胎盘组织样本: 产前检测样本,关注发育相关甲基化模式,重点筛查印记基因甲基化异常及胎儿健康测试。

6. 脑组织样本: 神经组织(如皮层、海马),检测神经退行性疾病相关甲基化热点,侧重单神经元甲基化分辨率和脑区差异分析。

7. 粪便样本: 肠道脱落细胞DNA提取,重点筛查结直肠癌特异性甲基化标志物及微生物组关联甲基化变化。

8. 尿液样本: 泌尿系统上皮细胞DNA,检测膀胱癌或肾病相关甲基化谱,侧重低丰度DNA富集和背景噪声控制。

9. FFPE样本: 福尔马林固定石蜡包埋组织,处理重点包括DNA修复和甲基化位点恢复,用于存档样本回顾性甲基化研究。

10. 植物样本: 叶片或种子DNA,分析植物表观遗传调控,侧重环境胁迫响应甲基化变化及转基因甲基化稳定性检测。

检测方法

国际标准:

  • ISO/IEC 17025:2017 检测实验室通用要求(涵盖甲基化数据质量控制)
  • ENCODE Consortium JianCes 基因组甲基化分析规范(定义β值计算和覆盖率阈值)
  • Illumina Infinium Methylation Assay Protocol 甲基化芯片操作指南(指定探针杂交条件和信号归一化)
  • BS-Seq Method 重亚硫酸盐测序标准(要求转换率≥99%和深度≥30X)
国家标准:
  • GB/T 37871-2019 生物样本DNA甲基化检测通则(规定样本处理和数据验证流程)
  • GB/T 30988-2014 甲基化敏感性PCR方法(设定扩增效率和特异性参数)
  • GB/T 35892-2018 高通量甲基化测序技术规范(定义捕获效率和均匀性指标)
  • GB/T 22760-2008 表观遗传分析基本要求(涵盖甲基化与表达关联分析方法)
方法差异说明:国际标准如ENCODE优先使用芯片平台,而国家标准GB/T 37871-2019强调重亚硫酸盐处理优化;在PCR检测中,GB/T 30988-2014要求更严格的引物设计GC含量(40-60%),而ISO标准允许更宽范围(30-70%);测序深度方面,国际标准推荐≥30X,国家标准GB/T 35892-2018设定最低20X但鼓励升级。

检测设备

1. 高通量测序仪: Illumina NovaSeq 6000(通量最高6Tb/run,读长2x150bp)

2. 甲基化芯片扫描仪: Agilent SureScan G4900DA(分辨率5μm,动态范围>4 logs)

3. PCR扩增仪: Bio-Rad CFX96 Touch(温控精度±0.1°C,通道数96)

4. 重亚硫酸盐处理系统: Zymo EZ DNA Methylation Kit配套设备(转化效率≥99%,处理时间≤90分钟)

5. 荧光定量PCR仪: Qiagen Rotor-Gene Q(检测灵敏度0.1拷贝,多色通道6)

6. DNA提取仪: MagCore HF16(产量≥95%,纯度A260/A280=1.8-2.0)

7. 凝胶电泳系统: Bio-Rad PowerPac Basic(电压范围10-300V,胶尺寸15cm)

8. 微阵列杂交仪: Agilent Hybridization Oven(温度控制±0.5°C,转速5-20rpm)

9. 紫外分光光度计: Thermo NanoDrop One(检测范围2-15000ng/μL,精度±1%)

10. 冷冻离心机: Eppendorf 5430R(最大转速15000rpm,温度范围-20°C至40°C)

11. 酶标仪: Tecan Infinite M200(波长范围230-1000nm,孔板格式96/384)

12. 生物分析仪: Agilent 2100 Bioanalyzer(DNA片段分析范围25-12000bp,精度±5%)

13. 恒温培养箱: Memmert IN110(温度稳定性±0.1°C,容量150L)

14. 液氮存储罐: Thermo CryoPlus 14(容量14L,蒸发率≤0.3L/day)

15. 纳米孔测序仪: Oxford Nanopore MinION(实时测序,读长>100kb)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

CMA/CNAS等证书详情,因时间等不可抗拒因素会发生变更,请咨询在线工程师.

合作客户(部分)

1、自创办以来和政、企、军多方多次合作,并获得众多好评;

2、始终以"助力科学进步、推动社会发展"作为研究院纲领;

3、坚持科学发展道路,统筹实验建设与技术人才培养共同发展;

4、学习贯彻人大精神,努力发展自身科技实力。

合作客户

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